Цоликлоны, как бы ни звучало это непонятное название, представляют собой лишь моноклональные антитела, помещенные в солевой раствор. Названием отдали должное месту работы изобретателей растворов – цоли (Центральный Ордена Ленина Институт). Ныне это Гематологический научный центр.
Препараты, названные цоликлонами применяются в качестве реагентов для определения группы крови и ее резус-фактора. Поставляются цоликлоны в пластиковых флаконах по 10 мл. или же в стеклянных (5 мл) в жидком виде. Флаконы для удобства снабжены капельницами.
Метод определения группы крови цоликлонами прост и точен. По этой причине он используется как основной.
Что такое цоликлоны
Для определения группы крови и установления резус-фактора в лабораториях используется несколько методов, и анализ с применением цоликлонов используется чаще всего. Эти антитела моноклинального типа, разработанные инженерами-генетиками, имеют повышенную активность и обеспечивают ускоренную реакцию агглютинации.Принцип действия заключается в соединении с агглютиногенами – химическими компонентами, находящимися на верхнем слое определенных эритроцитов. В зависимости от реакции становится возможным определение группы крови цоликлонами. О наличии в составе агглютиногена А говорит реагент анти-А, соответственно, агглютиноген B выявляют с помощью вещества анти-B.
Отметим, что цоликлоны являются достаточно универсальным инструментом. Они позволяют определять группу крови как в системе AB0 (с использованием реагентов анти-А (красная жидкость) и анти-B (синяя жидкость)), так и в системе резус (с использованием реагента анти-D (прозрачная жидкость)).
Определение группы крови цоликлонами
Чтобы узнать ГК, используя цоликлоны, необходимо взять изделие с плоской поверхностью (планшет), сами реагенты и две капли крови. Для анализа подходит практически любая жидкость независимо от состояния (законсервированная или без консерванта) и способа забора (из вены/пальца). Перед нанесением на поверхности планшета делаются пометки, показывающие, где будет использоваться тот или иной цоликлон.
После подготовки поверхности лаборант наносит на нее по крупной капле реагента: обычно анти-А располагают слева, а анти-B – справа. Затем к веществу добавляют по кровяной капле, ее размер должен быть десятикратно меньше объема нанесенной жидкости.
Планшет требуется осторожно раскачивать из стороны в сторону, чтобы цоликлоны и кровь перемешались, но капли с разными реагентами не слились друг с другом. Спустя несколько минут можно наблюдать полное соединение жидкостей либо реакцию агглютинации, когда эритроциты склеиваются, а и наступает свертывание.
Результаты исследования расшифровывают следующим образом:
- Отсутствие агглютинации в обоих случаях определяет первую группу.
- Сворачивание при воздействии цоликлона анти-А говорит о том, что кровь относится ко второй группе.
- Агглютинация в капле с реагентом анти-B – признак третьей группы.
- Выпадение осадка в обоих каплях говорит о принадлежности к четвертой группе.
В случае появления последней реакции данные требуется проверить с помощью повторных анализов: кровяная капля смешивается с цоликлоном анти-AB, появление агглютинации подтвердит результат первого исследования. Вторая проверка исключает склеивание эритроцитов неспецифичного типа, которое может произойти при наличии ряда тяжелых болезней.
В рамках второго исследования кровь добавляют в раствор хлорида натрия: если жидкость относится к четвертой группе, положительной реакции на физраствор быть не должно, иначе речь идет о наличии заболевания, меняющего свойства кровяных телец.
Определение резус-фактора
Цоликлоны позволяют определить и резус-фактор, анализ проводится следующим образом:- На поверхность планшета наносится приблизительно 0,1 мл реагента.
- Рядом капают 0,01 исследуемой крови.
- Цоликлон и изучаемую жидкость смешивают специальной стеклянной палочкой, каждые полминуты планшет необходимо покачивать.
При склеивании и выпадении осадка из эритроцитов кровь считается резус-положительной, а при отсутствии агглютинации резус-фактор получает отрицательную отметку. Увидеть результат при появлении хлопьев эритроцитов можно без использования специального лабораторного оборудования.
Нюансы процедуры
Точность исследования ГК и резус-фактора с помощью цоликлонов очень высока, однако порой анализ выдает неправильные результаты:
причиной является фактор человеческой ошибки, когда процедуру проводят с нарушениями.
Чтобы снизить риск такой ошибки, нужно помнить о следующих аспектах:
- Цоликлоны хранятся в холодильнике, оптимальный температурный режим – +2… +8 градусов по Цельсию. Если флакон распечатан, его содержимое нужно использовать в течение 30 дней, крышка должна быть плотно завинчена. Реагенты очень чувствительны к внешним воздействиям и при несоблюдении правил хранения или по истечении срока теряют свои качества, что приводит к ошибкам.
- Исследование проводится при ярком освещении, оптимальный режим в лаборатории – +15… +25 градусов по Цельсию. Если климатические условия не дают возможности соблюсти нужную температуру воздуха, поверхность планшета перед процедурой охлаждают.
- Важно не спутать, какие цоликлоны где находятся на планшете, для этой цели их местоположение обозначается на поверхности маркером. Хотя реагенты анти-А и анти-B имеют цветовое различие, после добавления крови оно практически исчезает.
- Следует соблюдать пропорции жидкостей: если эритроцитов будет слишком много, реакцию агглютинации будет сложнее отследить, в противоположном случае (слишком малый объем) склеивание происходит в замедлении.
- Нельзя допустить, чтобы две капли соединились: даже касание краями приводит к искажению результатов анализа. Если жидкости все же слились, исследование с помощью цоликлонов проводят сначала.
- При смешении при помощи лабораторной стеклянной палочки необходимо брать отдельный предмет для каждой изучаемой капли.
- Минимальная продолжительность наблюдения – 3 минуты, при неоднозначных результатах исследование длится до 5 минут.
В ходе процедуры можно отметить и реакции, способные ввести в заблуждение: например, замедленное склеивание происходит при воздействии второго реагента. Когда реакция затягивается, со временем жидкость подсыхает, что сопровождается естественным выпадением эритроцитов в осадок, поэтому этот результат не считается достоверным.
Также в ряде случаев отмечается оседание кровяных телец по краям: неопытные специалисты принимают эффект за склеивание, но в действительности это случается, если планшет оставили в неподвижном состоянии, наблюдая за реакцией. Только если поверхность слегка раскачивали, результат можно считать правильным.
Также определить группу может быть сложно, если пациент страдает от одной из болезней, изменяющих свойства кровяных телец. К таким заболеваниям относят проблемы печени, селезенки, пневмонию, ожоги различной степени, сепсис. Наличие таких болезней сильно обостряет способность эритроцитов выпадать в осадок, и панагглютинация наблюдается даже при воздействии физраствора.
С другой стороны, цоликлоны не вызовут агглютинацию, если пациент страдает лейкозом: при этой болезни кровяные тельца не реагируют даже на высокоактивные раздражители, такое же явление характерно для младенцев.
В этом случае анализ особенно труден, для максимально точного определения химического состава требуется провести дополнительные лабораторные исследования с использованием специального оборудования и других способов.
